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微生物鉴定中常用的生化反应 - 实验方法
酷尔化学 / 2021-08-30

 一、 淀粉水解试验

1. 准备淀粉培养基平板:将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中,待凝固后制成平板。
2. 接种:用记号笔在平板底部划成两部分,在每部分分别写上菌名,用接种环取少量的待测菌,点接在培养基表面的相对应部分的中心,其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌
3. 培养:将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。
4. 检测:取出平板,打开平皿盖,滴加少量的碘液于平板上,轻轻旋转,使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈,则说明淀粉已经被水解,表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。
二、油脂水解试验
1. 将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化,取出并充分振荡,使油脂均匀分布,再倾入无菌平皿中,待凝固成平板。
2. 接种:于同一平皿的两边接种,其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h,取出后观察平板菌苔颜色,如果出现红色斑点,即说明脂肪被水解了,此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。
三、明胶液化试验
1. 接种:用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。
2. 培养:放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长,则应放在最适温度下培养。
3. 观察结果:观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20℃时凝固,高于25℃时自行液化,若是在高于20℃下培养的细菌,观察时应放在冰浴中观察,若明胶被细菌液化,即使在低温下明胶也不会再凝固。
四、石蕊牛乳试验
1. 接种:将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。
2. 培养:将接种后的试管于37℃恒温培养7d,另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。
3. 结果观察:取出培养物,以不接种任何细菌的试管为对照,观察接种不同细菌生长后的变化情况。                              
五、甲基红试验(M.R.试验)
将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中,32℃培养 24h,加甲基红指示剂数滴,观察结果,呈现红色者为阳性,呈现黄色者为阴性。
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